Estudo da influência dos alelos do HLA classe I e II e do polimorfismo dos genes de citocinas na infecção pelo HTLV-1 / Study of the influence of hla class i and ii alleles and the polymorphism of cytokines genes in htlv-1 infection

O vírus linfotrópico para células T humanas (HTLV-1) é o principal agente causador da Paraparesia Espástica Tropical / Mielopatia associada ao HTLV-1 (PET/MAH) e da Leucemia da célula T do Adulto (LTA). [...]Fatores da interação HTLV-1/ hospedeiro estão envolvidos no risco de desenvolver doença. A lesão neurológica na PET/MAH parece ser consequência de uma reação inflamatória, desencadeada pelo reconhecimento de células infectadas por linfócitos T citotóxicos, com consequente liberação de citocinas e lesão medular. OBJETIVO: Identificar marcadores genéticos, que possam ajudar no prognóstico e tratamento dos pacientes portadores do HTLV-1. MÉTODOS: Nas amostras de 117 portadores do HTLV-1 assintomáticos e 171 pacientes com acometimento neurológico em acompanhamento na cidade do Rio de Janeiro, foram realizadas as tipificações dos genes do HLA Classe I e II, dos polimorfismos dos genes das citocinas -308TNF-α,-174IL-6, +874IFN-γ, códon 10 e 25TGF-β1 e -1082 - 819-592IL-10, e a quantificação da carga proviral. Os dados foram organizados em um banco de dados no programa SPSS. As frequências alélicas e genotípicas foram obtidas por contagem direta. O equilíbrio de Hardy-Weinberg foi avaliado para os polimorfismos das citocinas no sitio http://bioinfo.iconcologia.net/ubbweb/SNPStats_web, em relação ao HLA foram utilizadas as ferramentas disponíveis no sítio “Los Alamos HIV database tools”. As comparações entre os grupos foram realizadas através de tabelas de contingência 2x2 (quiquadrado, exato de Fisher e odds ratios), valores de p≤0,05 foram considerados significantes...

The human T cell lymphotropic vírus (HTLV-1) is the main causingagent of Tropical Spastic Paraparesis/HTLV-1 Associated Myelopathy (HAM/TSP) aswell as of Adult T Cell Leukemia (ATL). [...] Factorsrelated to the HTLV-1/host interaction may be involved in the risk of developing thediseases. The neurological lesion in HAM/TSP may be the consequence of aninflammatory reaction, triggered by the recognition of infected cells by cytotoxic Tlymphocytes, followed by the release of cytokines and central nervous system lesion.OBJECTIVE: This work aims to identify genetic markers, which may help in theprognosis and treatment of HTLV-1 patients. Methods: The polymorphism of the HLAClass I and II genes, as well as the TNF-α, IL6, IFN-γ, TGF-β and IL-10 cytokinegenes, and the proviral load were analysed in 117 asymptomatic HTLV-1 carriersand 171 HTLV-1 symptomatic carriers from Rio de Janeiro city. Data were organizedinto a database using SPSS. The Hardy-Weinberg equilibrium was evaluated forcytokine polimorphisms using the site http://bioinfo.iconcologia.net/ubbweb/SNPStats_web. The tools available in the site “Los Alamos HIV database tools” were used toanalyze the HLA polimorphisms. Comparisons between groups were made using 2x2contingency tables (Fisher Exact test/ χ2 and odds ratios), p values p≤0,05 wereconsidered significant...

Estabelecimento e caracterização de linhagens celulares infectadas pelo vírus linfotrópico de célula T humana do tipo I (HTLV-I)

O vírus linfotrópico de célula T humana do tipo I (HTLV-I) está associado etiologicamente ao desenvolvimento da leucemia da célula T do adulto (LTA) e da paraparesia espástica tropical/mielopatia associada ao HTLV-I (PET/MAH). O objetivo deste trabalho foi estabelecer linhagens celulares infectadas pelo HTLV-I e caracterizá-las quanto a: a) morfologia, b) tipo celular, c) proliferação contínua sem adição de fatores de crescimento, d) demonstrar a presença do DNA proviral integrado ao genoma das células das linhagens, e) caracterizar esta integração, f) verificar a expressão de partículas virais, g) expressão de citocinas e finalmente, h) avaliar o efeito de imunossupressores na proliferação celular. Estabelecemos três linhagens infectadas pelo HTLV-I a partir de células mononucleares de pacientes portadores de LTA. Não foi utilizada a técnica de co-cultivo com células não infectadas. As culturas apresentam células dismórficas, bi e multinucleadas com figuras de mitose, uma das linhagens manteve o fenótipo de célula T, enquanto que nas duas outras não foi possível caracterizar o tipo celular predominante, tendo havido perda de todos os marcadores de superfície, e não se conseguiu demonstrar rearranjo da cadeia g do TCR. Caracterizou-se a cepa de HTLV-I em relação à seu subtipo, sendo uma cepa Cosmopolita B, mais freqüente no Japão, local de origem do paciente doador das células e as duas outras do subtipo Cosmopolita A, cepa comum em várias regiões do Globo. Demonstrou-se haver dois clones celulares nas linhagens através do estudo do local de integração do DNA proviral, entretanto não podemos afastar a possibilidade de ser um único clone com dois DNAs provirais integrados. A expressão tanto de proteínas como de partículas virais não foi significativa, somente em uma linhagem conseguiu-se mostrar partículas virais por contrastação negativa em microscopia eletrônica. As linhagens expressam de forma constitutiva três citocinas IL-10, IL-15 e IFN-g com intensidade variável. E finalmente, as três linhagens foram resistentes à ação da Ciclosporina A. O estabelecimento destas linhagens possibilitará o estudo das vias de ativação alteradas pela infecção, assim como servirão de modelo experimental terapêutico para o ensaio in vitro de novas drogas.

The human T-cell type lymphotropic virus human type I (HTLV-I) is etiologically associated to two main diseases: a malignant one, the adult T-cell leukemia (ATL) and to a progessive myelopathy, tropical spastic paraparesis/HTLV-I- associated myelopathy (TSP/HAM). The objectives of this work were the establishment of HTLV-I-infected cell lines and the analysis of these lines in the following aspects: a) morphology, b) cellular phenotype, c) continuous proliferation without exogenous growth factors, d) presence of integrated HTLV-I DNA provirus; e) the type of integration (mono, oligo or policlonal) as well as the HTLV-I subtype, f) expression of viral proteins as well as viral particles, g) expression of cytokines; and finally h) evaliation of Cyclosporin A effect on the proliferation of the lines. We established three HTLV-I transformed cell lines. We established three HTLV-I transformed cell lines. The cells are large and dimorphic, showing two or multiple nucleus; one cell line remainde with the T cell phenotype. It was not possible to characterize the two others, due to the loss of their surface markers and, it was not possible to demonstrate the TCR g chain rearrangement. Concerning the HTLV-I subtype strain, one of the cell lines harbours the Cosmopolitan B subtype, which is more frequent in Japan, the place of origin of the cells’ donor. The other two cell lines are the Cosmopolitan A subtype, common in many regions around the world. Concerning provirus integration, the cell lines are oligoclonal. We were able to demonstrate two cellular clones in the lines by study of the local site of integration, but can not exclude the possibility to be just one clone with two proviral DNAs. The viral proteins as well as viral particles were not significantly expressed. Only one cell line showed viral particles in the negative staining technique on electronic microscopy. The three cell lines constitutively express, with variable intensity, the following citokines: IL-10, IL-15 e IFN-g. The infected cells proliferated even in the presence of 1 mg/ml of Cyclosporine A. The establishment of these cells will provide a helpful tool for the study of the activation pathways altered by the infection as well as an experimental model for therapeutic drugs assays.